Comment Calculer Kcat

Comment Calculer Kcat

Dans les reactions chimiques catalysees par une enzyme, l'enzyme diminue la quantite d'energie d'activation necessaire temporairement par la liaison du substrat et de l'enroulant dans une tendue de l'etat. Le k(catalyseur) ou "kcat" pour la reaction se refere a la concentration de la constante de la vitesse a laquelle une enzyme particuliere peut metaboliser un substrat en un produit d'une molecule. Pour calculer kcat, les scientifiques ont commence a melanger plusieurs tubes a essai avec differentes concentrations de substrat (connu comme un "dosage enzymatique") et de les tester a la constante de temps d'intervalle avec un peu de spectrophotometre pour mesurer les concentrations croissantes de produit molecules. Cette donnee est ensuite reporte sur un graphique et analysees.

Dans les reactions chimiques catalysees par une enzyme, l'enzyme diminue la quantite d'energie d'activation necessaire temporairement par la liaison du substrat et de l'enroulant dans une tendue de l'etat. Le k(catalyseur) ou 'kcat' pour la reaction se refere a la concentration de la constante de la vitesse a laquelle une enzyme particuliere peut metaboliser un substrat en un produit d'une molecule. Pour calculer kcat, les scientifiques ont commence a melanger plusieurs tubes a essai avec differentes concentrations de substrat (connu comme un 'dosage enzymatique') et de les tester a la constante de temps d'intervalle avec un peu de spectrophotometre pour mesurer les concentrations croissantes de produit molecules. Cette donnee est ensuite reporte sur un graphique et analysees.
les Choses dont Vous aurez Besoin

• donnees Brutes a partir d'un dosage enzymatique (c'est a dire, produit de la concentration en fonction du temps)

le Calcul des Vitesses Initiales

• Tracer un graphique de la concentration du produit en fonction du temps pour les donnees a partir du dosage enzymatique du premier tube a essai. Remarque: l'axe horizontal doit etre 'le temps', et l'axe vertical doit etre 'le produit de la concentration.'
• Calculer la droite de regression lineaire pour les points de donnees que vous avez trace dans la Section 1, l'Etape 1. Alors que microsoft Excel et graphiques calculatrices pouvez facilement determiner ce modele lineaire, vous pouvez obtenir une estimation de la droite de regression de pente en divisant la difference entre le produit de la concentration entre les points de donnees par leur difference dans le temps.
• Enregistrement de la pente de la droite de regression lineaire a partir de la Section 1, l'Etape 2 comme 'la reaction initiale de vitesse (Vo).' Remarque: dans la ligne de regression du modele '[concentration du produit] = m [temps] b, le coefficient de 'm' est la pente.
• Repetez les Etapes 1, 2 et 3 pour le reste des tubes a essai dans le test.

le Calcul de Vmax

• Complot a l'inverse de la concentration en substrat pour chaque tube a essai contre l'inverse de sa reaction initiale de vitesse (a partir de la Section 1, Etape 4). Par exemple, si la vitesse initiale pour un tube a essai avec un premier substrat concentration de 50 micromolaires (uM) a ete de 80 uM/s, l'inverse serait 1/50 de messagerie unifiee pour la concentration en substrat et 1/80 uM/s pour la vitesse initiale. Remarque: l'inverse de la concentration en substrat doit etre sur l'axe horizontal, et a l'inverse de la vitesse initiale doit etre sur l'axe vertical.
  Remarque: la concentration du substrat doit etre sur l'axe horizontal, et la reaction initiale de vitesse doit etre sur l'axe vertical.
• Determiner la droite de regression lineaire pour le graphique que vous avez trace dans la Section 2, l'Etape 1. Remarque: parce que vous aurez besoin de connaître le y-intersection de la droite de regression, vous devez entrer les points de la Section 2, l'Etape 1 dans un fichier Excel ou une calculatrice graphique et l'utilisation de l'integre dans le modele de regression de la fonctionnalite.
• 1 divise par la y-intersection de la droite de regression lineaire. Cela vous donnera la valeur de l'inverse de la Vmax, le maximum de la vitesse de reaction de l'enzyme. Remarque: si le modele de regression lineaire prend la forme '[Inverse Vo] = m [Inverse Substrat Conc.] b', puis la valeur de 'b' serait le y croiser. Diviser 1 par 'b' pour calculer l'inverse de Vmax.
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• 1 divise par le resultat de la Section 2, Etape 3 pour calculer la valeur reelle de Vmax.
• Determiner la concentration de l'enzyme a l'origine de dosage (voir les donnees brutes). Remarque: la concentration de l'enzyme est la meme pour tous les tubes a essai seulement le substrat concentrations varient dans le test.
• Diviser la Vmax (a partir de la Section 2, Etape 4) par la concentration de l'enzyme (a partir de la Section 2, Etape 5). Le resultat est la valeur de Kcat.