Comment développer des Bactéries Du Sol

Comment developper des Bacteries Du Sol

Un certain nombre de methodes existent pour l'etude des communautes microbiennes dans le sol. Une technique est de developper un large spectre de bacteries vivant dans le sol. Pour ce faire, un moyen qui favorise la croissance d'un grand nombre d'especes bacteriennes (dit "non selective") est necessaire. Un choix populaire est la Gelose Nutritive, qui est disponible dans le commerce ou peuvent etre crees a partir d'extrait de bœuf, de peptone et l'agar. Des dilutions en serie sont souvent fait des echantillons de sol pour creer gerable colonies de la culture afin de faciliter la poursuite de la recherche.

Un certain nombre de methodes existent pour l'etude des communautes microbiennes dans le sol. Une technique est de developper un large spectre de bacteries vivant dans le sol. Pour ce faire, un moyen qui favorise la croissance d'un grand nombre d'especes bacteriennes (dit 'non selective') est necessaire. Un choix populaire est la Gelose Nutritive, qui est disponible dans le commerce ou peuvent etre crees a partir d'extrait de bœuf, de peptone et l'agar. Des dilutions en serie sont souvent fait des echantillons de sol pour creer gerable colonies de la culture afin de faciliter la poursuite de la recherche.
les Choses dont Vous aurez Besoin

• Sterile dispositifs d'echantillonnage (modifie seringues, carottiers, etc.)
• Sol
• boîtes de Petri
• tubes a Essai

• 250 millilitre flacon
• un tampon Phosphate salin
• la Gelose Nutritive
• Steriles pipettes

la Collecte d'Echantillons

• Determiner le sol-echantillonnage de la procedure, y compris la taille de l'echantillon, de l'emplacement (verticale et horizontale) et de la frequence des echantillons seront preleves. Tres simple d'echantillonnage du sol procedure pourrait etre d'un seul, 2-millilitre d'echantillon de sol de surface pris dans un paturage sur un jour en particulier.
• souhaite Recueillir les echantillons de sol, en s'assurant de l'absence de contamination des echantillons. Une seringue jetable en plastique peuvent etre modifies dans un excellent outil d'echantillonnage en retrait de la pointe et de la sterilisation de la seringue. Un avantage de ce dispositif est la facilite avec laquelle la taille de l'echantillon peut etre mesuree volumetrique.
• Stocker les echantillons a la temperature ambiante jusqu'a ce que pret a etre mis en culture. Les echantillons doivent etre cultivees dans les 72 heures qui suivent le prelevement.

Preparation des Dilutions

• Ajouter un gramme de l'echantillon de sol a 99 ml de Tampon Phosphate Salin (PBS). Cela va creer un 1/100 de dilution de l'echantillon de sol, et le recipient doivent etre etiquetes de maniere appropriee.
• Melanger ou agiter la solution vigoureusement pendant au moins une minute. Le but de la manifestation est de suspendre les organismes presents dans la solution.
• Permettre au sol de la matiere particulaire a regler pour un maximum de 15 minutes. Decanter la partie liquide dans des tubes a essai marque a la appropriee de l'echantillon et le taux de dilution (1/100).
• le Transfert d'un millilitre de la dilution 1/100 dans un tube a essai contenant 9 ml de PBS a l'aide d'une pipette sterile. Cela va creer un 1/1000 dilution de l'echantillon. Agiter le tube a essai jusqu'a ce que l'echantillon est soigneusement melange, et s'assurer que l'echantillon est etiquete avec la appropriee de l'echantillon et de la dilution.
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• le Transfert d'un millilitre de la 1/1000 de la dilution dans un tube a essai contenant 9 ml de PBS a l'aide d'une pipette sterile. Cela va creer un 1/10,000 dilution de l'echantillon. Agiter le tube a essai jusqu'a ce que l'echantillon est soigneusement melange, et s'assurer que l'echantillon est etiquete avec la appropriee de l'echantillon et de la dilution. Supplementaires dilutions peuvent etre crees en tant que de besoin, en repetant les Etapes 4 et 5.

Culture

• Preparer les boîtes de petri pour la culture en versant chaud (45 ° C) Gelose Nutritive sur des boîtes de petri steriles jusqu'a ce que le fond de la plaque est couverte. Ajouter un millilitre de la dilution 1/100 de la plaque.
• melanger Delicatement la gelose sur le fond de la plaque comme il se refroidit. L'etiquette de la plaque avec la correspondante de l'echantillon et de la dilution (1/100).
• Repetez les etapes 1 et 2 pour chaque echantillon et a la dilution, a assurer la plaque est etiquete de façon appropriee.
• Couvrir les plaques et inverser une fois l'agar agar s'est solidifie sur le fond de la plaque. Les plaques de jeu pour deux jours a la temperature de la piece.
• Examiner les plaques et effectuer toute analyse supplementaire.

Conseils & Avertissements

• les Ecarts dans les methodes d'echantillonnage, de la dilution de la solution et de la culture, des medias peut etre necessaire dans certaines situations et a la culture, plus les bacteries exigeantes.
• Cette methode peut faciliter la croissance de nombreux champignons du sol ainsi que les bacteries.