La Sonication est une façon ubiquitaire, la méthode de cisaillement à cellules ouvertes en biologie moléculaire, cellulaire, microbiologie et d'autres laboratoires. La Sonication est utile, car il ne modifie pas la composition chimique des cellules ou des cellules de la mémoire tampon, et n'affecte pas les frais de cellules comme les électroporation méthodes. C'est un processus assez simple qui doit être ajusté en fonction de son expérience et de types cellulaires utilisés, et il y a seulement quelques conseils clés à suivre.
La Sonication est une façon ubiquitaire, la méthode de cisaillement à cellules ouvertes en biologie moléculaire, cellulaire, microbiologie et d'autres laboratoires. La Sonication est utile, car il ne modifie pas la composition chimique des cellules ou des cellules de la mémoire tampon, et n'affecte pas les frais de cellules comme les électroporation méthodes. C'est un processus assez simple qui doit être ajusté en fonction de son expérience et de types cellulaires utilisés, et il y a seulement quelques conseils clés à suivre.
Le Processus de
- tout d'Abord, préparer la cellule de l'échantillon dans son tampon ou des médias, et de refroidir l'échantillon dans un bécher de glace (ou de la glace d'eau pour un refroidissement plus rapide). Laver l'embout de la sonication de la machine avec de l'eau et essuyez avec un Kimwipe.Commutateur de la Sonication/Cellule Perturbateur de la machine, et d'ajuster la Puissance de Sortie à une puissance, en fonction du type de cellule et de l'expérience. Insérer la buse de la bac à ultrasons dans votre échantillon de cellules du tube et tourner sur la machine permettent de sonication à se produire pendant cinq à 30 secondes à la fois. (Permettant de sonication pendant plus de 30 secondes de façon drastique chauffe l'échantillon et peut souvent la cause de la dénaturation.) Alors que sonicating, déplacez doucement le tube d'échantillon autour de la buse pour permettre à la buse de l'accès aux différentes zones du volume. Il est généralement préférable de ne pas permettre la pointe de la buse pour atteindre près de la surface du volume, car cela peut provoquer un bouillonnement/écumant de votre échantillon.Après la première sonication, mélanger votre échantillon, en retournant à plusieurs reprises, puis sonication de nouveau pour une quantité égale de temps, tout en conservant l'exemple sur la glace.
Optimisation Est Important
- Il est généralement préférable d'optimiser votre sonication protocole différent pour chaque lignée cellulaire utilisée, que l'on doit trouver un équilibre idéal entre suffisamment de cellules cisaillé et un minimum de dénaturation/endommagement de l'échantillon. Cela peut être fait par sonicating pour différentes longueurs de temps et de Puissance de Sortie paramètres, puis de vérifier les cellules sous un microscope pour le fractionnement.Par exemple, on peut commencer par faire trois à cinq secondes rafales à 50% de la puissance, puis de plus en plus de temps et de puissance, si seulement une petite partie de la population de cellules apparaît fractionné sous le microscope.
Exemple Précis
- Par exemple, les cellules de E. Coli utilisé pour la croissance et la purification d'une surface de liaison au récepteur de la protéine (fragment C-terminal de Clostridium perfringens entérotoxine, ou 'C-CPE') peut être soniqués dans un volume de 7 à 10 ml pour deux 30-deuxième éclate à la Puissance de Sortie maximale. La suspension de cellules de tampon PBS 1x avec 0,2 mg/mL de lysozyme.La sonication de l'appareil utilisé pour cela est un Microson Ultrasonique de Cellules Perturbateur.
La Sonication Conseils
La Sonication est une façon ubiquitaire, la methode de cisaillement a cellules ouvertes en biologie moleculaire, cellulaire, microbiologie et d'autres laboratoires. La Sonication est utile, car il ne modifie pas la composition chimique des cellules ou des cellules de la memoire tampon, et n'affecte pas les frais de cellules comme les electroporation methodes. C'est un processus assez simple qui doit etre ajuste en fonction de son experience et de types cellulaires utilises, et il y a seulement quelques conseils cles a suivre.
La Sonication est une façon ubiquitaire, la methode de cisaillement a cellules ouvertes en biologie moleculaire, cellulaire, microbiologie et d'autres laboratoires. La Sonication est utile, car il ne modifie pas la composition chimique des cellules ou des cellules de la memoire tampon, et n'affecte pas les frais de cellules comme les electroporation methodes. C'est un processus assez simple qui doit etre ajuste en fonction de son experience et de types cellulaires utilises, et il y a seulement quelques conseils cles a suivre.
Le Processus de
- tout d'Abord, preparer la cellule de l'echantillon dans son tampon ou des medias, et de refroidir l'echantillon dans un becher de glace (ou de la glace d'eau pour un refroidissement plus rapide). Laver l'embout de la sonication de la machine avec de l'eau et essuyez avec un Kimwipe.Commutateur de la Sonication/Cellule Perturbateur de la machine, et d'ajuster la Puissance de Sortie a une puissance, en fonction du type de cellule et de l'experience. Inserer la buse de la bac a ultrasons dans votre echantillon de cellules du tube et tourner sur la machine permettent de sonication a se produire pendant cinq a 30 secondes a la fois. (Permettant de sonication pendant plus de 30 secondes de façon drastique chauffe l'echantillon et peut souvent la cause de la denaturation.) Alors que sonicating, deplacez doucement le tube d'echantillon autour de la buse pour permettre a la buse de l'acces aux differentes zones du volume. Il est generalement preferable de ne pas permettre la pointe de la buse pour atteindre pres de la surface du volume, car cela peut provoquer un bouillonnement/ecumant de votre echantillon.Apres la premiere sonication, melanger votre echantillon, en retournant a plusieurs reprises, puis sonication de nouveau pour une quantite egale de temps, tout en conservant l'exemple sur la glace.
Optimisation Est Important
- Il est generalement preferable d'optimiser votre sonication protocole different pour chaque lignee cellulaire utilisee, que l'on doit trouver un equilibre ideal entre suffisamment de cellules cisaille et un minimum de denaturation/endommagement de l'echantillon. Cela peut etre fait par sonicating pour differentes longueurs de temps et de Puissance de Sortie parametres, puis de verifier les cellules sous un microscope pour le fractionnement.Par exemple, on peut commencer par faire trois a cinq secondes rafales a 50% de la puissance, puis de plus en plus de temps et de puissance, si seulement une petite partie de la population de cellules apparaît fractionne sous le microscope.
Exemple Precis
- Par exemple, les cellules de E. Coli utilise pour la croissance et la purification d'une surface de liaison au recepteur de la proteine (fragment C-terminal de Clostridium perfringens enterotoxine, ou 'C-CPE') peut etre soniques dans un volume de 7 a 10 ml pour deux 30-deuxieme eclate a la Puissance de Sortie maximale. La suspension de cellules de tampon PBS 1x avec 0,2 mg/mL de lysozyme.La sonication de l'appareil utilise pour cela est un Microson Ultrasonique de Cellules Perturbateur.
La Sonication Conseils
By commentfaire
La Sonication est une façon ubiquitaire, la méthode de cisaillement à cellules ouvertes en biologie moléculaire, cellulaire, microbiologie et d'autres laboratoires. La Sonication est utile, car il ne modifie pas la composition chimique des cellules ou des cellules de la mémoire tampon, et n'affecte pas les frais de cellules comme les électroporation méthodes. C'est un processus assez simple qui doit être ajusté en fonction de son expérience et de types cellulaires utilisés, et il y a seulement quelques conseils clés à suivre.
