Comment Lire l'Électrophorèse des Protéines

Comment Lire l'Electrophorese des Proteines

Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel d'electrophorese (SDS-PAGE) est une methode biochimique de l'identification des proteines en solution. Comme illustre par Mathews et al dans "la Biochimie," les echantillons de proteines sont d'abord charge dans 'des puits ou des trous a une extremite du gel de polyacrylamide a bloc. Un champ electrique est applique au gel. SDS, a ajoute le charge des echantillons, nie le naturel, frais de proteines. Pour cette raison, les proteines de poids moleculaire seule determine la vitesse de migration des proteines, comme ils se deplacent a travers le gel vers le pole positif, des notes de Petits Bio. Plusieurs proteines dans le meme echantillon, par consequent, separes les uns des autres et de migrer vers differents postes.

le Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel d'electrophorese (SDS-PAGE) est une methode biochimique de l'identification des proteines en solution. Comme illustre par Mathews et al dans 'la Biochimie,' les echantillons de proteines sont d'abord charge dans 'des puits ou des trous a une extremite du gel de polyacrylamide a bloc. Un champ electrique est applique au gel. SDS, a ajoute le charge des echantillons, nie le naturel, frais de proteines. Pour cette raison, les proteines de poids moleculaire seule determine la vitesse de migration des proteines, comme ils se deplacent a travers le gel vers le pole positif, des notes de Petits Bio. Plusieurs proteines dans le meme echantillon, par consequent, separes les uns des autres et de migrer vers differents postes.
les Choses dont Vous aurez Besoin

• Photographie de gel de SDS-PAGE, vitrail
• Touche de marqueur de poids moleculaire utilise

• Regle
• Stylo

• Orienter le gel de la photographie. 'Top' est l'emplacement du puits ou les echantillons ont ete initialement ajoute. 'D'en bas' est l'endroit ou les echantillons ont migre vers et le plus souvent contient le colorant avant qui indique avant de la migration des echantillons. Soit la gauche ou la droite doit contenir un 'marqueur', utilise comme un previsible poids moleculaire guide.
• etiqueter les echantillons pour chaque voie. Sur le dessus, les echantillons ajoutes dans les puits seront passes a la verticale dans les 'voies.' Par consequent, toutes les barres visibles dans une colonne verticale est venu a partir de l'echantillon charge directement au-dessus d'elle. Utiliser la regle et un stylo pour mettre des frontieres sur les voies si il est difficile de visualiser les colonnes.
• Etiquette moleculaire tailles des bandes dans le marqueur de voie. Disponibles dans le commerce des marqueurs de venir avec une photo de la bande de motif a attendre avec le poids moleculaire de chaque bande. Les bandes sont le noir horizonal 'bars', qui sont en fait des proteines colorees incorpore dans le gel.
• Tirage au sort de la lumiere, des lignes horizontales s'etendant a partir de chaque marqueur de la bande vers le bord oppose du gel. Soyez prudent de faire ces lignes paralleles aux puits et a la teinture avant. Ces lignes indiquent ou les proteines de poids moleculaire indique par chaque marqueur bandes seraient situes dans chaque ruelle. Par exemple, une bande dans le couloir 4 qui se trouve juste en dessous de l'extension de la ligne a partir de la 25-kilodalton marqueur de la bande suggere que la voie 4 de la bande est presque mais pas tout a fait 25 kilodaltons poids moleculaire.
• l'Etiquette de chaque bande dans chaque voie avec sa masse moleculaire estimee. Utiliser les marqueurs comme un guide, et d'estimer les valeurs entre les tailles des marqueurs.
• ci-Dessous le gel de la photographie, faire une liste de 'proteines' pour chaque voie. Commencer par dire ce qui est connu au sujet de chaque echantillon, telles que son origine ou des conditions. Puis la liste de la masse moleculaire estimee de chaque bande de la voie. Voies avec une bande indiquent que l'echantillon ne contient qu'une seule proteine. Les voies multiples bandes indiquent la presence de plusieurs proteines. Les bandes qui s'executent avec la migration de l'avant sont plus petites que suggere par le marqueur le plus proche et probablement ne peut pas etre predit a l'exception de 'plus petit que' le marqueur indique.
• Dans les proteines de la liste, note de bizarreries. Un 'enduit' apparence peut indiquer que trop de proteines sont presentes ou que la viscosite de l'echantillon affecte sa migration Si des bandes semblent aller au-dela du bord de la voie ou sont tres grandes en comparaison avec d'autres groupes, puis la concentration de cette proteine est probablement trop elevee et doit etre dilue dans l'avenir de l'electrophorese. Une teinte grisatre tout au long de la voie, plus sombre que l'arriere-plan de gel de couleur, indique indiscernables des fragments de proteines.
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• Determiner l'identite des proteines dans chaque ruelle. Bien que ceci est fait en utilisant uniquement le poids moleculaire, la source de chaque voie sera probablement indiquer des indices. Considerer que, sous certaines conditions, les proteines peuvent maintenir un dimere ou trimere de l'association sur un gel. Par consequent, une proteine peut apparaître sur un gel de trois bandes distinctes. Meme si les proteines ne peuvent pas etre identifies, la relative obscurite des bandes peut impliquer les concentrations des proteines en solution. Tout curieux et inconnu de proteines peuvent etre isolees directement a partir de l'original et de gel envoye pour l'identification.